Thiết lập kỹ thuật nested - PCR phát hiện gen hpc100 chẩn đoán nhiễm nấm Histoplasma capsulatum

Tóm tắt

Nghiên cứu nhằm mục tiêu thiết lập các điều kiện của kỹ thuật nested PCR để phát hiện nhiễm nấm Histoplasma capsulatum dựa vào gen đích Hcp100. Kỹ thuật sau khi xây dựng được thử nghiệm đánh giá trên ADN tổng số tách chiết từ các mẫu dịch rửa phế quản của bệnh nhân có hội chứng viêm đường hô hấp dưới. Kết quả nghiên cứu cho thấy, kỹ thuật nested PCR với phản ứng PCR1 (cặp mồi HcI, HcII) cho kết quả tốt khi nồng độ Mg2+ là 2,0mM, nhiệt độ gắn mồi 50oC; phản ứng PCR2 cho kết quả tốt khi nồng độ Mg2+ là 1,5mM, nhiệt độ gắn mồi 65oC. Giới hạn phát hiện của kỹ thuật là 10fg ADN plasmid của nấm H. capsulatum. Các mồi sử dụng cho kỹ thuật nested-PCR có tính đặc hiệu cao với nấm H. capsulatum. Để đánh giá hiệu quả của kỹ thuật nested PCR đã xây dựng, 96 mẫu ADN tách chiết từ dịch rửa phế quản của bệnh nhân có hội chứng viêm đường hô hấp dưới đã được kiểm tra và đều cho kết quả ấm tính. Nuôi cấy cũng cho kết quả tương tự. Đây là kỹ thuật cho kết quả nhanh, tin cậy và có thể lựa chọn để phát hiện nhiễm nấm H. capsulatum.